Железнодорожная больница в Ростове-на-Дону основана в 1911 году, а для совершения необходимых церковных треб на её территории была сооружена деревянная часовня, которая функционировала до 1938 года.
Первое название этой часовни не установлено. Во время Великой Отечественной Войны, в 1943 году, помещение часовни было разрушено.
Новая каменная часовня спроектирована архитектором Натальей Ивановной Овчаренко и была освящена во имя равноапостольного великого князя Владимира в феврале 2001 года архиерейским чином в присутствии губернатора области В. Чуба, представителя Президента РФ в крае В. Казанцева и других представителей города.
Регулярных богослужений в часовне не проводится и она предназначена в основном для заказываемых нуждающимися церковных треб. По епархиальной принадлежности часовня приписана к церкви святителя Димитрия, митрополита Ростовского.